免疫胶体金的制备原理(下)

2025-12-04 16:06:48

当蛋白前处理完成后,然后要确定胶体金与蛋白融合的绝佳pH值。对理化性质模棱两可的蛋白这一步至关重要。过量的蛋白与不同pH值的胶体金融合后,仅有某一特定pH值可以产生融合比较稳的探针。在胶体金厂家浓度较高的电解质溶液(如NaCl)作用下不容易凝聚。不一样蛋白的适合pH范围的宽度大不一样。一般选择适合pH值。但有些探针的具体情况并不完全这样,稳的探针并不完全意味着活力好,这靠的是实验验证。

在确定好pH值后,然后要确定蛋白量,即可以产生平稳探针的蛋白的极少量。若是在制取探针时加入太多蛋白,不但导致消耗,同时更为严重是指容易造成探针凝结,并严重影响标识活力。由于探针溶液中的分散蛋白容易提前与标识结构域融合,具有“封闭式”(Blocking)功效,而胶体金探针标识不了。在标识点位稀少、被标记物成分较少的前提下要特别注意。

胶体金具有较高的动力学模型可靠性,在稳定要素不会受到毁坏时本身凝结极慢,可存放多年不会凝结。影响稳定的要素主要包括:电解质溶液、胶体溶液浓度、环境温度、非电解质等。胶体金厂家说胶体金溶液必须有少许电解质溶液作增稠剂,但浓度值不能太高。浓度较高的吸水性非电解质能剥掉颗粒外边的凝固膜使之凝结。少量高分子物质促进胶体溶液凝结,但一定量的高分子物质可增加胶体溶液稳定性,如蛋白质、葡萄糖、PEG20000等添加有较好的稳定效果。

当胶体金溶液吸咐蛋白质后,胶体溶液的稳定随溶液pH而变化,而这种变化又在于吸咐蛋白质的等电点,如ConA,过氧化酶等,当pH较低时保持稳定,提升pH则显得不稳定,贴近等电点或偏高时又变得稳定了。标识后胶体金水溶液可以用0.2~0.5mg/mlPEG20000做为增稠剂。在4~10℃存储数月合理,不适合冷冻。存储中可能发生程度不同的凝结,可离心去除。

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